당전이 효소가 도입된 CHO 세포에서 생산된 재조합 EPO의 당쇄구조 분석

Abstract

1. CHO 세포에 당전이 효소인 β1,4-Galactosyltransferase(GT)와 α 2,3-sialyltransferase(ST)를 도입하였다. 2. CHO 세포배양을 통해 얻어진 배양액에서 Immunoaffinity column을 이용하여 EPO를 순수분리정제 하였다. 3. GT와 ST를 도입하여 얻어진 EPO(GTST15)의 경우 control(EC1)에 비해 tri-ialylated glycan 양이 EC1에서의 17.3%에서 35.5%까지 향상이 되었고 GTST15에서의 mono-sialylated glycan의 양은 EC1에서의 31.2%에서 18.1%까지 줄어든 것을 볼 수 있었다. 4. 2-D HPLC를 이용한 당쇄구조 분석에서 EC1에서 상대적인 양을 가장 많이 차지하는 Gal가 3개, lactosamine unit3개, Fuc를 갖는 tetra-antennay 구조는 GTST15에서 상대적인 양이 많이 줄어든 것을 볼 수 있었다. 반면 Gal 4개, lactosamine unit5개, Fuc를 갖는 tetra-antennary 구조는 GTST에서 현저하게 증가된 것을 볼 수 있었다.