M13 벡타 속으로 클로닝된 DNA에 존재하는 제한효소자리의 인식

Abstract

M13 벡타에 반대방향으로 클로닝된 DNA 절편이 서로 결합한 이중가닥 DNA와 단일가닥 벡타 DNA를 포함하고 있는 부분적으로 혼성체화 된 구조를 형성하게 하였다. 이 혼성체 구조를 제한효소 HaeIII, HinfI 또는 Sau3AI으로 처리하였을 때 삽입된 DNA가 선택적으로 절단되어 이중가닥 DNA 절편과 단일가닥 벡타 DNA가 생성되었다. 이 중 Sau3AI의 작용을 자세히 조사하였다. 그 결과 이 반응에서 8자형 DNA의 이완작용이나 비선택적 절단이 속도결정단계가 아니라는 것을 밝혔다. 8자형 DNA에서 결합된 다중연결자에 존재하는 BamHI 자리는 Sau3AI에 의하여 절단되지만 BamHI에 의해서는 절단되지 않는다. 이 사실은 이 자리에서의 DNA 구조가 효소작용에 영향을 미친다는 것을 보여준다. 삽입된 DNA로부터 유도된 이중가닥 DNA 절편을 이 방법으로 얻어 디데옥시 염기결합 순서 결정법의 시발물질로 사용하였다. 이를 이용하여 단일가닥 벡타에 클로닝된 긴 DNA의 염기결합 순서를 결정하는 방법을 제안하였다.