Tryptophan probe를 이용한 리보스 결합단백질의 folding 연구

Abstract

단백질 folding과 막전위의 관련성에 대해 세부적으로 분석하기 위하여 N domain에 있는 3번 threonine을 tryptophan 형광 probe로 치환하였다. 이 T3W 돌연변이의 안정성은 equilibrium 연구와 kinetic 연구결과 야생형에 비해 약간 낮아졌음을 관찰하였다. 3번 tryptophan probe를 이용하여 복귀돌연변이의 folding 특성을 관찰하였다. T3W-G241S 이중 돌연변이 단백질에 대한 equilibrium과 kinetic 연구결과 안정성과 folding 속도가 각 단일 돌연변이에 대해 가산적임을 관찰하였다. Kinetic 연구결과에서 다른 단백질에서는 관찰하지 못했던 빠른 phase를 발견하였는데 이 phase는 매우 빨리 나타났으며 뒤이어 나타나는 느린 phase의 amplitude에 반대였다. 이 결과로 판단하건대 refolding과정에서 Trp3 주변에서 아미노산 side chain의 재배열이 일어나는 것으로 추측되는데 이러한 현상은 folding과정에서 molten globule에서 native로의 전이 과정을 반영하는 것일 가능성이 높다. 신호배열결함을 포함하는 전구체 형태의 RBP에 대한 folding연구도 이 Trp3 probe를 이용하여 수행되었다. Equilibrium과 kinetic 연구결과 전구체 단백질의 안정성은 숙성체에 비해 약간 감소하였고 folding 속도도 약간 느려졌다. 이 결과는 이전의 tyrosine probe를 이용한 folding 연구 결과와 일치한다(Teschke et al, 1991).